طرز تهیه بافر های مورد نیاز در آزمایشگاه بیولوژی مولکولی

اولین وظیفه فرد در آزمایشگاه مولکولار بیولوژی تهیه بافر های مورد نیاز میباشد.  همه  واکنشهای بیولوژی در بافر مخصوص انجام میشوند . معمولا"مواد اصلی بافر هارا در آزمایشگاه بصورت ذخیره  ((Stock   تهیه میکنند و بافر های مورد نیاز روزانه را  از مواد ذخیره تهیه مینمایند . بعضی از مواد ذخیره و مولاریته آنهابه این شرح است:

نام ماده	مولاریته ( غلظت )	نام ماده	مولاریته ( غلظت)
Ammonium Acetate	10M	NaCl	5M
Tris pH ( 8, 7.5 , 7.4)	1M	CaCl2	1M
NaOH	5N	EDTA	0.5M
Ethidium bromide	1mg/ml	SDS	10%
X-gal	20mg/ml	KAc	5M
IPTG	200mg/ml	NaAc	3M

برای تهیه محلول کار از مواد ذخیره از فرمول زیر استفاده میشود

M1V1=M2V2

M1 مولاریته  ماده ذخیره                          V1حجم ماده ذخیره که باید برای بافر برداشته شود

 M2مولاریته بافر موردنیاز                         V2حجم بافرخواسته شده

مثلا" برای تهیه  50 میلی لیتر TE  بافر   10 میلی مولار تریس و 1میلی مولار EDTA   چنین عمل میکنیم :

50x10 = ?x1000, 500:1000= 0.5cc ( 500 μl) Tris

50x1 = ? x500 , 50:500 = 0.1cc ( 100μl ) EDTA

روش کار: 500μl از بافر تریس و 100μl از  EDTA را درظرف مدرج ( لوله فالکن  ) ریخته و حجم آن را به 50ml میرسانیم .